1. Trang chủfruitSản phẩm KHCNfruitHoa và Cây cảnhfruitQuy trình kỹ thuật

Quy trình nhân giống hoa lan Hồ điệp bằng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào

1.Vào mẫu tạo nguyên liệu khởi đầu
- Vào mẫu từ ngồng hoa: Ngồng hoa còn non (chưa nở hoa) có chứa mắt ngủ được lấy để vào mẫu. Rửa sạch mẫu dưới vòi nước chảy, dùng dao sắc cắt mẫu thành từng đoạn, mỗi đoạn chứa 1 mắt ngủ. Tráng lại bằng nước cất rồi đưa vào khử trùng ở Box cấy vô trùng. Tiến hành khử trùng mẫu lần 1 bằng dung dịch HgCl2 0,1% trong thời gian 5 phút, tráng lại 4-5 lần bằng nước cất vô trùng, bóc bỏ phần lá bao bên ngoài để lộ ra mắt ngủ rồi khử trùng tiếp lần 2 cũng bằng dung dịch HgCl2 0,1% trong thời gian 1 phút. Rửa sạch mẫu, cắt bỏ phần mẫu bị tổn thương do hoá chất khử trùng gây rồi dùng panh cấy các mẫu vào  môi trường đã chuẩn bị sẵn, mỗi mẫu 1 bình.
Môi trường vào mẫu: VW+ 100 ml ND + 10g Đường + 2mg/lBA +0,3 mg/lKi
2. Nhân nhanh và tạo cây hoàn chỉnh
- Nhân nhanh từ gieo hạt: Hạt gieo sau 5-7 ngày bắt đầu nảy mầm, sau 20 ngày bắt đầu hình thành thể tiền chồi (PLBs: Protocorm Like Bodies). Sau 1,5 tháng được cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh: 
VW + 100ml/l Nước dừa+ 10g/l Đường + 30g/l Khoai tây+ 30g/l Cà rốt +1g/l pep ton 
+ 0,3 g/l Than hoạt tính + 6,5 g/l agar
Định kỳ 2 tháng cấy chuyển một lần.  Sau 4-5 vòng cấy chuyển trên môi trường nhân nhanh sẽ tạo thành cây hoàn chỉnh với 4-5 lá, trọng lượng cây ≥3 gram đủ tiêu chuẩn  ra ngôi trồng ngoài vườn ươm.
- Nhân nhanh bằng nuôi cấy lát mỏng: Nguyên liệu để cắt lớp mỏng là thể Protocorm hoặc chồi non mới được hình thành hoặc mới qua một lần cấy chuyển cấy. Chiều dày lát mỏng là 0,3-0,5cm. Môi trường nuôi cấy lát mỏng: 
VW + 100mlND + 0,5mm 2,4D + 0,3mg Kinetin + 10g đường Saccaroza + 6,5g agar/lít
Sau khi nuôi cấy được khoảng 30 ngày các mẫu cấy  sẽ bắt đầu phát sinh hình thái hình thành nên các PLBs. Sau khi PLBs hình thành, tiến hành  cấy chuyển các PLBs  sang  môi trường  nhân nhanh để chúng tiếp tục phát sinh hình thái tạo thành cây hoàn chỉnh
Trong quá trình nuôi cấy, bổ sung 1g PVP (polyvinyl pirollidon)/lít môi trường để ngăn ngừa hiện tượng hoá đen môi trường.  Số vòng cấy chuyển là  4-5 lần, sau đó phải vào mẫu mới để thay thế. 
Loại bình cấy thích hợp sử dụng trong nuôi cây in vitro là bình trụ thủy tinh miệng rộng 110. Nút đậy bình là nút cao su có màng trao đổi khí.
Điều kiện phòng nuôi cây in vitro: 
- Nhiệt độ: 25± 20C
- ánh sáng: 2.500-3.000 lux
- Quang chu kỳ: 12-14 giờ chiếu sáng/24 giờ
3. Ra ngôi chăm sóc cây ngoài vườn ươm
- Tiêu chuẩn cây ra ngôi: Cây có đủ thân lá, rễ, không bị nấm bệnh, trọng lượng tươi ≥ 3 g/cây.
- Huấn luyện cây trước khi ra ngôi bằng cách mở nút bình từ 90-120 phút vào buổi sáng trong điều kiện môi trường vườn ươm là tốt nhất.
- Cây con lấy ra khỏi bình được rửa sạch, xử lý thuốc trừ nấm Ridomil (nồng độ 3 g/lít) trong khoảng 3 phút
- Giá thể là rêu khô (dớn) dược xử lý bằng chế phẩm EM, nồng độ 1ml/lít nước ngâm 30 phút, sau đó vắt sạch.
- Trồng cây vào giá thể trong bầu có đường kính 5 cm lưu ý quấn giá thể quanh gốc cây đảm bảo chặt và sau đó đưa cây vào bầu.
- Đặt cây trên khay, loại khay có 4 rãnh, chiều ngang rãnh 5 cm 
- Che lưới đen cho cây đảm bảo cường độ ánh sáng 3000 - 4000lux
- Nhiệt độ: 25 – 31 oC, ẩm độ không khí 65-85%
- Tưới nước và dinh dưỡng: Trong 15 ngày đầu chỉ tưới nước, phun nhẹ trên lá bằng vòi phun tay, giữ ẩm cho giá thể. Sau 15 ngày, phun cho cây bằng chế phẩm Vitamin B1, nồng độ 50ml/100 lít, định kỳ phun 7 ngày/lần. Sau khi cây được 1 tháng, tưới cho cây bằng phân NPK với tỷ lệ 30:20:10 với nồng độ 40g/100 lít nước, định kỳ tưới 7 ngày/lần.
- Những ngày không phun, tưới dinh dưỡng phải chú ý giữ ẩm cho cây, thông thường 2-3 ngày tưới 1 lần bằng vòi phun tay.
- Sau 6 tháng thì có thể sang bầu 8,3 cm.